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流式細(xì)胞術(shù)單標(biāo)實(shí)驗(yàn)

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

流式細(xì)胞術(shù)單標(biāo)實(shí)驗(yàn)流式細(xì)胞術(shù)工作原理是在細(xì)胞分子水平上通過(guò)單克隆抗體對(duì)單個(gè)細(xì)胞或其他生物粒子進(jìn)行多參數(shù)、快速的定量分析。它可以高速分析上萬(wàn)個(gè)細(xì)胞,并能同時(shí)從一個(gè)細(xì)胞中測(cè)得多個(gè)參數(shù),具有速度快、精度高、性好的優(yōu)點(diǎn),是當(dāng)代的細(xì)胞定量分析技術(shù)之一。
流式細(xì)胞術(shù)(單標(biāo))實(shí)驗(yàn)是常見(jiàn)實(shí)驗(yàn)之一。

產(chǎn)品型號(hào):
更新時(shí)間:2026-03-20
廠商性質(zhì):代理商
訪問(wèn)量:2633
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步:實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與準(zhǔn)備
  • 確定靶標(biāo)分子:明確要檢測(cè)的蛋白(如CD4, CD19, CD34等)。


  • 選擇抗體與熒光染料:


    • 高表達(dá)抗原:可選擇多種染料(FITC, PE, APC等)。


    • 低/弱表達(dá)抗原:必須選擇高亮度染料,如PE, APC, Brilliant Violet 421,以獲得更好的信噪比。


    • 抗體特異性:選擇經(jīng)過(guò)驗(yàn)證的、適用于流式檢測(cè)的抗體。


    • 熒光染料選擇:根據(jù)目標(biāo)分子的表達(dá)豐度和儀器配置選擇:


  • 設(shè)計(jì)對(duì)照組:這是數(shù)據(jù)可信度的生命線(詳見(jiàn)下文)。


第二步:樣本制備與染色
  1. 制備單細(xì)胞懸液:確保細(xì)胞分散良好,無(wú)團(tuán)塊,活性高。


  2. 細(xì)胞計(jì)數(shù)與分裝:將細(xì)胞分裝至流式檢測(cè)管(如1.5 mL EP管或流式管),通常每管約1-5×10^5個(gè)細(xì)胞。


  3. 封閉:加入Fc受體阻斷劑或血清,冰上孵育10-15分鐘,減少非特異性吸附。


  4. 抗體染色:


    • 直接法:加入適量體積的熒光標(biāo)記抗體(關(guān)鍵步驟:需預(yù)行抗體滴定確定用量)。輕輕混勻。


    • 間接法:先加未標(biāo)記一抗,孵育洗滌后,再加熒光標(biāo)記的二抗(現(xiàn)在較少用,多色時(shí)代多用直接法)。


  5. 孵育與洗滌:


    • 避光、4°C孵育20-30分鐘。


    • 加入過(guò)量預(yù)冷染色緩沖液(如2 mL),離心(如300-400g, 5分鐘,4°C)。


    • 小心棄上清(可留約50μL液體,防止吸走細(xì)胞沉淀),彈散細(xì)胞。此步驟可重復(fù)一次以確保洗去游離抗體。


  6. 重懸與上機(jī):用適量體積(如300-500μL)的染色緩沖液重懸細(xì)胞,過(guò)篩網(wǎng)后置于流式管中,盡快上機(jī)檢測(cè)。若需區(qū)分死細(xì)胞,可在一步加入死活染料。





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