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當前位置:首頁技術文章人脂肪來源的干細胞原代分離培養(yǎng)操作方案

人脂肪來源的干細胞原代分離培養(yǎng)操作方案

更新時間:2026-07-03點擊次數(shù):82

具體流程如下:

1. 取臨床來源人體脂肪組織稱重,添加含 2% 雙抗的 PBS 溶液洗滌 3 次;

2. 無菌條件下使用眼科剪,將脂肪組織剪至體積約 1mm3的細小組織塊;

3. 加入5mL I型膠原酶,置于 37℃、80rpm 搖床消化 50~60 min;

4. 加入等體積wan全培養(yǎng)基中和膠原酶,終止消化反應;

5. 采用 70μm細胞篩過濾懸液,除去未充分消化的結締組織與細胞團;

6. 室溫條件下 1800 rpm 離心 10 min;

7. 離心后上層漂浮大量脂滴,先用吸管吸取大部分脂滴,再棄去全部上清;

8. 配制wan全培養(yǎng)基(DMEM/F12 + 10% 胎牛血清 FBS + 1% 雙抗)重懸細胞沉淀;

9. 細胞懸液接種至培養(yǎng)器皿進行培養(yǎng);

10. 接種 48 h 后進行換液;

11. 后續(xù)常規(guī)每周更換 2 次培養(yǎng)液;

12. 持續(xù)培養(yǎng) 7~10 d,脂肪干細胞逐步達到細胞融合狀態(tài)。


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